Методы проведения санитарно-микробиологических исследований. Вода омч

1. Определение омч воды до стерилизации.

По 1 мл исследуемой воды вносят в 2 чашки Петри с расплавленным и охлажденным до 40—45 оС МПА, тщательно перемешивают и выдерживают сутки в термостате при 37 °С, затем двое суток при комнатной температуре. После инкубации ведется подсчет выросших колоний на 2 чашках и определяется среднее арифметическое.

Для выявления плесневых и дрожжевых грибов по 0,5 мл исследуемой воды засевают в чашки Петри на среду Сабуро и инкубируют при температуре 20-22 °С в течение 3-4 суток. После инкубации подсчитывают число колоний грибов на обеих чашках, находят среднее арифметическое, и путем суммирования определяют число микроорганизмов, отражающее ОМЧ исследуемой дистиллированной воды.

2. Определение коли-титра дистиллированной воды до стерилизации

может быть проведено одним из двух методов:

а) Двухфазный бродильный метод (см.: Н. П. Блинов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии для фармацевтических факультетов и институтов. 1988. С. 79-81).

б) Метод мембранных фильтров. Метод позволяет проводить по сев воды непосредственно в аптеке, пропустив необходимое ее количество через мембранные фильтры. Фильтры кладутся на поверхность среды Эндо и после доставки в лабораторию помещаются в термостат. После двухсуточной инкубации в термостате учитывается рост колоний. Внимание обращается на наличие лактозоположительных колоний (темно-красные, с металлическим блеском). Расчет величины коли-титра ведется исходя из количества воды, пропущенной через мембранный фильтр, и числа выросших лактозоположительных колоний.

Санитарные требования к получению, транспортировке и хранению дистиллированной воды (очищенной и воды для инъекций) даны в Приказе № 309, п. 7.

Ситуационные задачи по теме

1. Для микробиологического контроля взята дистиллированная вода из бюретки над столом ассистента. Перед взятием заборщикне обжег края бюретки. Получены следующие результаты: коли-титр — 300 мл, ОМЧ — 173 КОЕ/мл.

Правильно ли был проведен забор воды? Как трактовать полученные результаты? Соответствуют ли они нормативам?

2. Для микробиологического контроля дистиллированной воды проба взята из бюретки над столом ассистента. Перед взятием пробы заборщик обжег края бюретки в пламени спиртовки. Получены следующие результаты: коли-титр — 500 мл, ОМЧ — 8 КОЕ/мл.

Правильно ли проведен забор воды? Как трактовать полученные результаты? Соответствуют ли они нормативам?

3. Дистиллированная вода, предназначенная для приготовления глазных капель, взята из баллона сразу после перегонки и послана на микробиологическое исследование. Получены следующие результаты: ОМЧ — 20 КОЕ/мл, энтеробактерии не обнаружены.

Как трактовать полученные результаты?

Можно ли использовать такую дистиллированную воду для приготовления глазных капель?

4. Дистиллированная вода, предназначенная для приготовления глазных капель, взята из баллона сразу после перегонки и послана на микробиологическое исследование. Получены следующие результаты: ОМЧ — 83 КОЕ/мл, энтеробактерии не обнаружены.

Как трактовать полученные результаты? Соответствуют ли они нормативам?

Можно ли использовать данную воду для приготовления глазных капель?

5. На микробиологическое исследование поступила дистиллированная вода, используемая для приготовления лекарственных форм (кроме инъекционных растворов и глазных капель). Получены следующие результаты: ОМЧ — 175 КОЕ/мл, коли-титр — 100 мл, выявлен рост протея, грибы не обнаружены.

Соответствуют ли полученные данные нормативам? Можно ли использовать эту воду по назначению?

6. На исследование поступила дистиллированная вода, используемая для приготовления лекарственных форм (кроме инъекциионных растворов и глазных капель). Получены следующие результаты: ОМЧ — 11 КОЕ/мл, коли-титр — 300 мл, протей отсутствует, отмечено наличие плесневых грибов.

Как трактовать полученные результаты?

Соответствуют ли они нормативам?

Можно ли использовать эту воду по назначению?

7. На микробиологическое исследование поступила дистиллированная вода, предназначенная для приготовления лекарственных форм (кроме инъекционных растворов и глазных капель). Получены следующие результаты: ОМЧ — 10 КОЕ/мл, коли-титр — 500 мл, плесневые грибы, протей отсутствуют.

Как трактовать полученные результаты?

Соответствуют ли они нормативам?

Можно ли использовать эту воду по назначению?

Методы проведения санитарно-микробиологических исследований — МегаЛекции

(предусматривают определение общей микробной обсеменённости (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов).

Санитарно-микробиологическое состояние почвы оценивается на основании сопоставления количества термофильных бактерий и бакте-рий – показателей фекального загрязнения. Почвы с преобладанием санитарно-показательных бактерий расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязнённые фекалиями человека или животных. Присутствие в почве E. coli и Enterococcus faecalis указывает на свежее (до 2 недель), бактерий родов Citrobacter и Enterobacter – на несвежее (до 2 месяцев), а Clostridium perfringens – на давнее (более 2 месяцев) фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения коли-индекса – количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1 г почвы, перфрингенс-титра – масса почвы (в граммах), в которой обнаружена 1 особь Clostridium perfringens, общего числа сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.

Микробиологические нормативы для оценки санитарного состояния почвы:

– чистая почва: коли-титр – 1 и выше; перфрингенс-титр – 0,01 и выше; ОМЧ – 100-1000;

– загрязнённая почва: коли-титр – 0,9-0,01; перфрингенс-титр – 0,009-0,0001; ОМЧ – 1000-100000;

– сильно загрязнённая почва: коли-титр – 0,009 и ниже; перфрингенс-титр – 0,00009 и ниже; ОМЧ – 10000-4000000.

Для определения ОМЧ почву берут на глубине 10-15 см стерильным ножом (из разных мест не менее 10 проб) в стерильную банку. Из проб готовят навеску 30 г, которую вносят в колбу с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Готовят разведения 10-3, 10-4, 10-5. Из 2-х последних разведений 0,1 мл смешивают с 40 мл 0,7% расплавленного и остуженного до 450С МПА, после чего выливают двойным слоем в чашки с 2% агаром. Инкубируют в термостате. Подсчитывают количество выросших колоний.

Для определения коли-титра, перфрингенс-титра различные разведения почвенной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера. Инкубируют при 430С 48 часов. При получении в средах газообразования и помутнения производят высев петлей на среду Эндо. Отбирают типичные для кишечной палочки колонии, делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При выявлении в мазках грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Если проба отрицательная, проверяют ферментативные свойства выделенной культуры посевом на полужидкую среду с глюкозой. Появление в среде кислоты и газа подтверждает наличие E. coli. Определяют коли-титр по наименьшему объёму, в котором обнаруживают БГКП.

Для определения перфрингенс-титра различные разведения почвенной суспензии засевают в пробирки со стерильной железосульфитной средой Вильсон-Блера. После 48 часов инкубации при 430С учитывают результаты по образованию черных колоний C. perfringens в агаровом столбике среды. Мазки окрашивают по Граму, микроскопируют (крупные грамположительные палочки со спорами овальной формы, центрального или субтерминального расположения), вычисляют перфрингенс-титр (наибольшее разведение посевного материала, посев которого приводит к почернению и разрыву среды в первые 12 часов роста при 430С).

Санитарно-микробиологическое состояние питьевой воды оценивается по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству мезофильных факультативно-анаэробных микроорганизмов (МЕФАМ) в 1 мл воды; присутствию общих и термотолерантных колиформных бактерий.

По эпидемиологическим показаниям, в воде дополнительно определяют наличие энтерококков, сальмонелл, шигелл, вибрионов, энтеровирусов.

Определение общего числа микроорганизмов

Общее микробное число (ОМЧ) - общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать колонии на питательном агаре при t=370С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.

Из каждой пробы воды делают посев не менее двух объёмов по 1 мл. Для этого 1 мл воды вносят в стерильную чашку Петри, заливают 6-8 мл расплавленного и остуженного до 45-460С питательного агара, тщательно перемешивают. После застывания агара чашки помещают вверх дном и инкубируют при 370С в течение 24 часов. Затем подсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Подсчитанное количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на 2. Результат выражают в КОЕ (колониеобразующих единиц) в 1 мл исследованной пробы воды.

Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий

К общим колиформным бактериям относятся грамотрицательные, не образующие споры палочки, не обладающие оксидазной активностью ферментирующие лактозу или маннит с образованием альдегида, кислоты и газа при 370С в течение 24 часов.

Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками общих колиформных бактерий, но, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при 440С в течение 24 часов.

Микробиологические и паразитологические показатели питьевой воды

(согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)

Примечания: 1 – при определении проводится 2-кратное исследование по 100 мл отобранной пробы воды; 2 – превышение норматива не допускается в 95% проб, отбираемых в точках водоразбора наружной и внутренней водопроводной сети в течение 12 месяцев, при количестве исследуемых проб не менее 100 за год; 3 – определение проводится только в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть; 4 – определение проводится только при оценке эффективности технологии обработки воды.

Метод мембранных фильтров

Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Воду фильтруют в объёме 333 мл. Затем фильтры Зейтца помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 370С в течение суток подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП. Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. Для этого фильтр с выросшими на нём колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-n-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% раствором глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 370С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре.

Бродильный метод

Засевают 3 объёма воды по 100 мл (для качественного анализа) или при исследовании воды с целью количественного определения общих колиформных бактерий делают посев 3 объёмов по 100 мл, 3 – по 10 мл и 3 – по 1 мл.

Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лактозо-пептонной среды, посев 1 мл воды – в 10 мл среды обычной концентрации.

Посевы инкубируют при 370C в течение 24-48 часов. Через 24 часа из питательной среды, где отмечено наличие роста и образование газа, делают высев по секторам на среду Эндо, приготовленную с добавлением фуксина.

Положительный результат на присутствие общих колиформных бактерий в данном объёме воды дают по помутнению и образованию газа на среде накопления (глюкозо-пептонная среда или лактозо-пептонная среда) и наличию красных колоний на среде Эндо. В сомнительных случаях выполняют оксидазный тест и подтверждают способность к газообразованию на среде с лактозой или маннитом (глюкозой).

Результат отрицательный, если

– в среде накопления нет признаков роста,

– на секторах среды Эндо нет роста лактозоположительных колоний,

– на секторах среды Эндо выросли нехарактерные для колиформных бактерий колонии,

– все колонии оказались оксидазоположительными,

– если в подтверждающем тесте на среде с лактозой или маннитом (глюкозой) не отмечено газообразования.

Наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий (общих и термотолерантных колиформных бактерий) – вычисляют по специальным таблицам.

Санитарно-микробиологическое состояние воздухазакрытых помещений оценивают по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству особей, обнаруживаемых в 1 м3 воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий: гемолитических стрептококков, золотистых стафилококков, а также дрожжевых и плесневых грибов.

Согласно СанПиН 2.1.3.1375-03, воздушная среда помещений лечебных учреждений и аптек по уровню бактериальной обсемененности разделена на 4 класса.

Микробиологические показатели для оценки воздушной среды аптечных учреждений можно определить путем посева воздуха седиментационным (по Коху) или аспирационным методом (в аппарате Кротова).

Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их функционального назначения и класса чистоты

Седиментационный метод (по Коху) – оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха. Он заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на определённое время (5-10 минут на общую обсеменённость и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, маркируют и выдерживают 24 часа в термостате и 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязнённости воздуха: по приблизительному подсчёту на площадь 100 см2 в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Аспирационный метод – более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов. Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.

После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:

где N – количество выросших на чашке колоний;

V – объём пропущенного через прибор воздуха, дм3;

1000 - искомый объём воздуха, дм3.

Наличие санитарно-показательных для воздуха микроорганизмов – золотистого стафилококка, гемолитического стрептококка, плесневых грибов, кандид – определяют по характеру выросших колоний на специальных средах (желточно-солевом агаре, кровяном агаре, среде Сабуро) и при микроскопическом изучении бактерий из этих колоний.

Контрольные вопросы

Каковы особенности ферментных систем бактерий? Как регулируется продукция ферментов у бактерий? Какие группы ферментов различают в зависимости от механизма, которым регулируется продукция фермента? Какое практическое значение имеет изучение ферментативной активности бактерий? Методы изучения сахаролитической и протеолитической активности бактерий. Дифференциально-диагностические среды: перечислите, назовите основные составные части и применение. На какое изменение среды реагирует индикатор в этих средах? По какому признаку дифференцируются бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева? Каким свойством должны обладать бактерии, чтобы образовать на этих средах окрашенные колонии? Если бактерии образуют бесцветные колонии, что это означает? Среды Гисса их состав и применение. Что такое «пёстрый» или «цветной» ряд? Среда Олькеницкого, её состав; как производится посев и как отмечают на этой среде ферментацию разных углеводов, образование сероводорода? Что представляют собой микротест-системы для определения ферментативной активности микробов; как производят посев и как учитывают результаты? Что такое СИБ; как используется эта система, как производится посев и учёт результатов? Укажите основные объекты внешней среды, которые подвергаются санитарно-бактериологическому исследованию. Микробиоценоз, определение понятия. Перечислите и дайте характеристику межвидовых взаимоотношений в микробиоценозах. Какие показатели определяются при бактериологической оценке объектов внешней среды? Санитарно-показательные микроорганизмы: определение понятия. Какими свойствами должны обладать санитарно-показательные микроорганизмы? Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы для воздуха, воды, почвы. Микрофлора воды: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воды. Методика определения общего микробного числа воды. Показатели фекального загрязнения воды, методы их определения. Укажите предельно допустимые показатели для питьевой воды. Микрофлора воздуха: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воздуха, методы их определения. Микрофлора почвы: постоянная микрофлора, её значение для круговорота веществ в природе. Источники загрязнения почвы патогенными микроорганизмами. Показатели для санитарно-бактериологической оценки. Для каких заболеваний факторами передачи могут быть вода, воздух, почва? Некультивируемые формы бактерий: определение понятия, практическое значение.

megalektsii.ru

Определение общего микробного числа (ОМЧ) в исследуемой пробе воды — КиберПедия

Таблица 6 – Число колоний на МПА при температуре 37°С

Для расчета концентрации ОМЧ при температуре 37°С используется формула 1.

X (ОМЧ, 37°С) = = 110,81 КОЕ/мл

Рисунок 18 – Цельная проба Рисунок 19 – Концентрация 10-1

Рисунок 20 – Концентрация 10-2

При температуре 37°С на чашках выросли колонии трех типов:

1 тип: крупные колонии, есть точечные и мелкие; форма колоний – круглая; профиль колоний – выпуклый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний– непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.

2 тип: колонии средние; форма колоний – круглая; профиль колоний – выпуклый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – мутные; цвет колоний – оранжевые. Окраска по Граму выявила грамположительные длинные палочки.

3 тип: форма колоний – круглая; профиль колоний – врастающий в субстрат; структура колоний – однородная; прозрачность колоний – прозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамположительные короткие палочки.

Рисунок 21 – препарат 1 типа

колоний

Рисунок 23 – препарат 3 типа колоний

Таблица 7 – Число колоний на МПА при температуре 22°С

Для расчета концентрации ОМЧ при температуре 22°С используется формула 1.

X (ОМЧ, 22°С) = = 130,63 КОЕ/мл

Y = , (2)

где Y – соотношение ОМЧ при температуре 22°С и ОМЧ при температуре 37°С, [КОЕ/мл]

Y = КОЕ/мл

Рисунок 24 – Цельная проба Рисунок 25 – Концентрация 10-1

Рисунок 26 – Концентрация 10-2

При температуре 22°С на чашках выросли колонии трех типов:

1 тип: крупные колонии, есть точечные; форма колоний – неправильная; профиль колоний – изогнутый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – мутные; цвет колоний – кремовый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.

2 тип: крупные колонии; форма колоний – круглая; профиль колоний – плоский; край колоний – неправильный; структура колоний – неоднородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, шероховатая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.

3 тип: крупные колонии; форма колоний – круглая; профиль колоний – изогнутый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.

Рисунок 27 – препарат 1 типа

колоний

Рисунок 29 – препарат 3 типа колоний

Таблица 8 – Сравнительная характеристика полученных показателей с требованиями к составу и свойствам воды водных объектов рекреационного водопользования

Выводы:

I. Изучили физико-химические показатели пробы воды из пруда в Боровиках города Кирова:

1. Характер запаха пробы воды землистый. При температуре 22°С интенсивность запаха слабая, а при 60°С – заметная. Интенсивность запаха соответствует норме.

2. Показатель pH пробы воды составил 8,2 ед. pH, следовательно, среда слабощелочная, соответствует норме.

3. Плавающих примесей в пробе воды не обнаружено.

II. Определили микробиологические показатели исследуемой пробы воды:

1. Концентрация общих колиформных бактерий (ОКБ) составила 32 КОЕ/мл. Что превышает норму для рекреационного водопользования в 6,5 раз.

2. При определении термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) при температуре 37°С колонии выросли из всех разведений, окраска мазков по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки во всех разведениях. При температуре 44°С колонии выросли только из разведения с концентрацией 10-3, окраска мазков по Граму выявила грамотрицательные длинные палочки.

3. Оксидазный тест положительный у культуры с концентрацией 0,09, выросшей при температуре 37°С. У остальных культур оксидазный тест отрицательный.

4. При 37°С на чашках с МПА выросло 3 типа колоний. Окраска по Граму выявила грамотрицательные и грамположительные палочки.

5. Общее микробное число (ОМЧ) при 37°С составило 110,81 КОЕ/мл.

6. При 22°С на чашках с МПА выросло 3 типа колоний. Окраска по Граму выявила грамотрицательные палочки.

7. Общее микробное число (ОМЧ) при 22°С составило 130,63 КОЕ/мл.

8. Соотношение ОМЧ при температуре 22°С к ОМЧ при температуре 37°С составило 1,2 КОЕ/мл. Следовательно, водоем не способен к самоочищению.

Тема 2

cyberpedia.su

Смотрите также

• 
  Белковая вода
• Вода артек
• 
  Артек вода
• 
  Армянская вода
• 
  Вода функциональная
• 
  Вода толуол
• 
  Толуол вода
• 
  Руны воды
• 
  Микроэлементы воды
• 
  Съедобная вода
• 
  Вода пропиленгликоль